pSPYCE-35S BiFC Vector 植物雙分子熒光互補載體

產品信息： 

【注意事項】：

（1） 我司提供的所有質粒（載體）僅保證質粒（載體）的關鍵部位測序正確，不保證實驗效果。

（2） 商業化的質粒（載體）即使是開發公司也未做過完整測序。如果測序序列和原始參考序列有99%以上相同，則默認供應載體為正確載體。

（3） 我司質粒（載體）以少量干粉或液體形式提供。以干粉形式提供的質粒（載體）默認規格為2μg（不保證具體量），只保證用戶能轉化和擴繁到目的質粒。

背景信息

雙分子熒光互補技術（Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC），原理在于將熒光蛋白分割成兩個不具有熒光活性的分子片段（N-fragment，C-fragment），將這兩個熒光蛋白的片段分別融合兩個目標蛋白A、B，如果A與B蛋白發生相互作用，在空間上互相靠近，就會重新構建成完整的具有活性的熒光蛋白分子，在激發光下，熒光蛋白發熒光；反之，若A與B蛋白之間無相互作用，則熒光蛋白就不能發光。

根據瞬時表達所需的轉化方法來選擇所需的載體對，常用的有以下兩對（來自文獻：Walter M, Chaban C, Schütze K, et al. Visualization of protein interactions in living plant cells using bimolecular fluorescence complementation. The Plant Journal : for Cell and Molecular Biology. 2004 Nov;40(3):428-438. DOI: 10.1111/j.1365-313x.2004.02219.x. PMID: 15469500.）

構建流程：

j 選擇待研究的基因構建BiFC載體；

k 通過瞬時表達方法比如：農桿菌浸染法（agro-infiltration）共轉載體對；

l 植物活細胞水平觀察YFP來源的熒光蛋白表達。

基本信息

質粒圖譜

保存與運輸方法

保存：-20℃保存，至少1年有效。 

運輸：冰袋運輸。

使用方法（供貨形式：少量干粉質粒）

【注】：

①以下質粒轉化方法僅做參考。實際的轉化方法請根據感受態細胞來調整和優化。

②收到質粒后，務必先進行轉化，挑取單克隆擴增，提取后再使用。

1）于實驗前，將質粒（載體）干粉從低溫取出置于室溫回溫至少20min。于5000rpm低速離心1min，將粉末都沉淀至管底。加入20μl無菌水溶解質粒，室溫放置1min。

2）從-80℃取出相應的感受態，置于冰盒上解凍，做好標記。

3）取2μl質粒加至100μl感受態內，冰浴30min。

4）42℃熱激60s，冰上靜置2min，此過程不可搖動EP管。

5）加入900μl無抗生素的LB液體培養基，180rpm，37℃振蕩培養45min。

6）6000rpm離心5min，僅留100μl上清混勻菌體沉淀。

7）將混勻后的菌液加到含相應抗性的LB平板上，倒入適量玻璃珠，涂布均勻。

8）將平板正向培養1h，再倒置培養12~16h。

9）挑取單克隆菌落到含相應抗性的LB液體培養基中，220rpm振蕩培養12-16h，根據實驗需要提取質粒。

【注】：如果轉化平板上長的菌落過多，請將質粒按比例稀釋后再轉化，原則上以能挑取到單克隆為宜。如果沒有菌落，則加入10μl質粒轉化。請不要直接將質粒轉入表達感受態，要先轉克隆感受態，重提質粒后再轉入表達感受態。

注意事項

1） 我司提供的載體/質粒/菌株都經過嚴格的質量控制。請收到貨后先進行轉化，再挑取單克隆擴增。產品使用中若遇到質量問題，請和我司及時溝通。

2） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。