INVSc1 Chemically Competent Cell  

酵母菌化學感受態細胞

產品信息

產品包裝

保存與運輸方法

保存：其中感受態細胞按標簽注明置于-80℃保存，三個月有效。其他組分按照標簽注明保存，一年有效。

運輸：干冰運輸。

產品描述

INVSc1菌株是一種快速生長的釀酒酵母菌，是一款非常理想的重組蛋白表達菌株，但因孢子生成能力弱，不適合用于基因分析研究。配套的質粒有：pYES3/CT、pYC 2、pYES2系列。當這些質粒（比如：pYES2）與INVSc1菌配套使用，會激活pYES2質粒上的GAL1啟動子的轉錄，進而啟動下游重組蛋白的表達。INVSc1是二倍體細胞，是組氨suan、亮氨suan、色氨suan、尿mi啶缺陷型菌株，可直接通過PEG/LiAc將pYES2質粒轉化進入INVSc1細胞內。質粒pYES2的篩選標志為URA，可用SD-URA平板進行篩選。

本品為經特殊工藝制備的INVSc1酵母菌化學感受態細胞，用pYES2質粒檢測轉化效率＞104 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存三個月。

基因型

MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52

注意事項

1） 最好在冰上融化感受態細胞。

2） 轉化高濃度質粒可相應減少用于涂板的菌量。同時轉化2-3種質粒可適當增加質粒的用量。

3） INVSc1對高溫敏感，最適生長溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長速度和轉化率都呈指數下降。

4） 酵母菌在缺陷培養基上生長速度比YPDA培養基慢，營養缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養可見直徑1mm克隆；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養可見直徑1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養可見直徑1mm克隆；

5） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1） 取100 µl冰上融化的INVSc1化學感受態細胞，依次加入預冷的目的質粒2-5 µg，預處理的Carrier DNA（95-100℃水浴3 min或95℃金屬浴5min，快速冰浴3min。重復一次。處理完快速插入冰中，待用。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時翻轉6-8次混勻）。

2） 之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時翻轉6-8次混勻）。

3） 5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH2O重懸沉淀，離心30s棄上清。

4） 用50 µl ddH2O重懸，涂板，放入29℃培養48-96 h。 

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附錄I培養基配制

一、質粒篩選用培養基：SD/-Ura培養基配制（1L）

酵母氮源基礎（YNB）                 6.7g

葡萄糖                               20g

氨基酸缺陷混合物（DOsupplement-Ura for pYES2）      適量（詳見說明書）

補水到1L，用1M NaOH調pH至5.8。

瓊脂粉（Agar）                       20g（僅限固體培養基）

121℃，15min高壓滅菌。

二、蛋白誘導用培養基：SGR/-Ura培養基配制（1L）

酵母氮源基礎（YNB）                 6.7g

氨基酸缺陷混合物（DOsupplement-Ura for pYES2）      適量（詳見說明書）

補水到800 mL，用1M NaOH調pH至5.8。

121℃，15min高壓滅菌。

待培養基溫度冷卻到55℃左右，加入已過濾的碳源：100ml 20%半乳糖，100m 10%棉子糖。混勻即可。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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