Cal-500 AM, Cell Permeant  鈣離子熒光探針

產品標簽

Cal-500 AM; Cal-520 AM;鈣離子熒光探針; Fura-2 AM; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin, Free Base離子霉素;

產品信息

產品描述

鈣離子測定在各種生理活動中發揮著重要作用，與鈣離子結合從而表現出光譜反應的熒光探針使得研究人員能夠觀察胞內游離鈣離子水平變化，通過熒光顯微鏡、流式細胞儀、熒光光度計和熒光酶標板來檢測。

Cal-500是一款紫外激發的鈣離子熒光探針，最大發射波長~500nm。斯托克斯位移大于100nm。也能用405nm藍紫色激發器激發，中等鈣親和探針，Kd值~303nM。Cal-500的激發光譜和FITC、Alexa Fluor 488和GFP能良好的區分，因此，適合與GFP細胞系、FITC/AlexaFluor 488標記的熒光素或其他紅色標記的熒光素進行多重標記實驗。在CHO和HEK細胞中，Cal-500 AM具良好的細胞鈣響應。

Cal-500 AM具有細胞膜滲透性，能夠預加載進入細胞。一旦進入細胞，AM基團被酯酶裂解，產生帶負電荷的熒光染料，留在細胞內部。一旦與鈣離子結合后，它們的熒光顯著加強。一旦與鈣離子結合后，它們的熒光顯著加強。當細胞被激動劑刺激后，受體發出細胞內鈣釋放的信號，從而使得Cal-500的熒光增加。

保存與運輸方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

運輸：冰袋運輸。

產品特性

注意事項

1） 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后請在干燥的環境放至室溫后再開封。由于試劑微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 試劑準備

1） 配制Pluronic F-127母液：稱取100mg Pluronic F-127粉末（貨號：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不用冷藏。如有結晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。

2） HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4)或者其他生理緩沖液

B，儲存液和工作液（2×）準備

1） 用無水DMSO溶解Cal-500 AM配制成2-5mM的儲存液，或將已配好的Cal-500 AM儲存液取出于室溫回溫。（如：若配制成4mM的母液，需向50µgCal-500 AM中加入12.3µl無水DMSO）。

【注①】：用DMSO重溶的Cal-500 AM是無色透明溶液。

2） 用含0.04% Pluronic F-127的HHBS或其他生理緩沖液將Cal-500 AM+DMSO儲存液稀釋到2-20µM染色工作液。

【注①】：添加一定量的20%Pluronic F-127溶液到Cal-500 AM+DMSO儲存液，使Pluronic F-127的濃度約為0.04%。Pluronic F-127可以防止AM探針在溶液中聚合并促使探針更好進入細胞。但Pluronic F-127可降低AM探針的穩定性，因此只建議在配制工作液時加入，不建議加入儲存液長期保存。

【注②】：Cal-500 AM應用在大部分細胞的推薦加載濃度為4-5µM，具體的使用濃度需根據實驗要求進行優化。為了避免過度加載造成細胞毒性，建議在取得有效結果的基礎上盡量使用最di探針濃度。

【注③】：Cal-500 AM工作液需現配現用，避免反復凍存。

3） 【可選】如果細胞內（比如CHO細胞）含有機陰離子轉運體，丙huang舒（Probenecid，1-2mM）可能需要加入上述染色工作液內（在孔內的最終濃度為0.5-1mM），以降低去酯化探針的泄露水平。

【注①】：我司提供多種丙huang舒：包括水溶性的丙huang舒（MZ8472-154MG），能降低有機溶劑的使用。

C，染色步驟（以下步驟僅做參考，用戶根據特定實驗需求做調整。）

1） 用生長培養基，過夜培養細胞；

2） 往細胞培養板內加入等體積的2×染色工作液使其為1×。如果血清與藥物會有反應或干擾，加入染料前，先將生長培養基更換成新鮮的HHBS。

3） 37℃孵育30-60min。

4） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理緩沖液（如有必要，使用含轉運體抑制劑如1mM丙huang舒的緩沖液）清洗細胞1~2次，以去除殘留探針。

5） 之后在HHBS或其他生理緩沖液（如有必要，使用含轉運體抑制劑如1mM丙huang舒的緩沖液）中，用合適的激發/發射波長來檢測熒光（見產品特性：Cal-500 AM的激發和發射光譜）。如有必要加入刺激劑，同時檢測熒光。

【注①】：對于熒光顯微鏡檢測，建議用DAPI濾片來檢測，建議用黑框/透明底的細胞培養板

【注②】：對于熒光酶標儀檢測（要用帶自動液體處理系統比如FDSS、FLIPR或FlexStation），建議用激發波長：400nm，發射波長500nm，cut-off波長470nm來檢測，建議用黑框/透明底的96孔板；儀器設置：底部讀數且攜帶自動液體處理系統。

附錄ICal系列鈣離子探針的波長和鈣離子結合特性

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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